Partículas Lentivirales de Activación (h) Sos 1: sc-401135-LAC

SOS1 codifica el homólogo 1 de Son of sevenless (Sos1), un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para Ras que cataliza el intercambio de GDP por GTP en RAS aguas abajo de tirosina quinasas receptoras activadas y de complejos adaptadores como GRB2. Al acoplar la señalización por factores de crecimiento con la vía RAS–RAF–MEK–ERK e interactuar con la actividad de la vía PI3K–AKT, Sos1 contribuye a la regulación de la proliferación, la diferenciación, la migración y la dinámica del citoesqueleto. La función alterada de SOS1 o una señalización aguas arriba desregulada pueden modificar la salida de MAPK y son relevantes para estudios sobre dependencias de señalización oncogénica y mecanismos del desarrollo asociados a rasopatías. Por lo tanto, SOS1 es un nodo útil para analizar la amplitud y la duración específicas del estímulo en MAPK, el control por retroalimentación y el crosstalk entre vías en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Sos 1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SOS1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Sos 1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SOS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Sos 1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SOS1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.