SOCS-3 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-419666-ACT-2

マウスのSocs3は、サプレッサー・オブ・サイトカイン・シグナリング3（SOCS-3）をコードしており、誘導性の負のフィードバック制御因子として、JAKキナーゼ活性を阻害し、さらにSH2ドメインとSOCSボックスを介してシグナル伝達構成要素のユビキチン依存的な分解（ターンオーバー）を促進することで、サイトカインおよび増殖因子のシグナル伝達を減衰させる。SOCS-3はIL-6ファミリーおよびレプチン受容体の経路を調節し、炎症、免疫細胞分化、代謝恒常性を制御するSTAT3依存的な転写プログラムの形成に関与する。SOCS-3活性の異常は、サイトカイン応答性の変化やマクロファージの極性化の変容を介して、慢性炎症状態、インスリン抵抗性、ならびに腫瘍関連のシグナル伝達環境と関連付けられている。マウスモデルにおけるSocs3遺伝子編集は、JAK/STAT回路の動態、サイトカイン駆動性の転写制御、そして免疫・代謝表現型に対する細胞種特異的な寄与の機序解明研究を支える。

SOCS-3 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Socs3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SOCS-3 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Socs3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSocs3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SOCS-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSocs3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSOCS-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSocs3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSOCS-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。