SNX19 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406007-ACT

O SNX19 humano (sorting nexin 19) codifica uma sorting nexina contendo um domínio PX, implicada na associação a membranas dependente de fosfoinositídeos e no tráfego endossomal. Como parte da rede mais ampla de sorting nexinas, o SNX19 está ligado a processos de transporte do endossomo para o Golgi e do endossomo para a membrana plasmática, que influenciam a reciclagem de receptores, a renovação de proteínas de membrana e a organização espacial da sinalização. Por meio dessas funções no transporte vesicular e na dinâmica de membranas, alterações na atividade do SNX19 podem afetar vias de homeostase celular que são frequentemente perturbadas em contextos de doenças complexas, incluindo sinalização desregulada e fenótipos metabólicos. Assim, o SNX19 é de interesse para estudos mecanísticos que conectam o tráfego intracelular à modulação de vias e a mudanças no estado celular.

SNX19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNX19 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNX19 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNX19 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNX19, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNX19. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNX19 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNX19 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNX19 em células tumorais com expressão de SNX19 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.