SNX17 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403452-ACT

SNX17 (sorting nexin 17) é um adaptador endossomal que contém um domínio PX, liga-se a fosfoinositídeos e reconhece motivos NPxY para controlar a reciclagem endocítica de diversas proteínas de membrana. Por meio de interações com os complexos Retriever/CCC e com a maquinaria de tráfego associada ao retromer, o SNX17 auxilia a triagem de receptores a partir de endossomos precoces de volta para a membrana plasmática, moldando assim a saída de sinalização, a captação de nutrientes e a comunicação célula–matriz. Ao regular a disponibilidade na superfície celular de cargas como membros da família do receptor de LDL e integrinas, o SNX17 influencia vias ligadas à homeostase lipídica, à migração e à organização do citoesqueleto. A desregulação do tráfego dependente de SNX17 tem sido associada a alterações na sinalização de receptores e tem sido estudada em contextos que incluem fenótipos metabólicos, neurobiologia e comportamento celular relacionado ao câncer.

SNX17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNX17 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNX17 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNX17 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNX17, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNX17. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNX17 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNX17 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNX17 em células tumorais com expressão de SNX17 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.