Plásmido CRISPR de Activación (h) SNRPA: sc-404128-ACT

SNRPA codifica la proteína A de la ribonucleoproteína nuclear pequeña U1, un componente esencial del complejo U1 snRNP que reconoce los sitios dadores de empalme 5′ e inicia el ensamblaje del espliceosoma durante el empalme del pre-ARNm. A través de su papel en la selección de sitios de empalme y en el acoplamiento de la transcripción con el procesamiento de ARN, SNRPA ayuda a mantener la integridad del proteoma y programas regulados de expresión génica. La perturbación de proteínas del espliceosoma como SNRPA puede remodelar los paisajes de empalme alternativo, influyendo en vías que incluyen la vigilancia del ARN y el control del ciclo celular. La maquinaria de empalme desregulada se observa con frecuencia tanto en la biología tumoral como en contextos neurodegenerativos, lo que convierte a SNRPA en un nodo útil para estudiar el estrés del procesamiento de ARN y la dependencia del espliceosoma en células humanas.

SNRPA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SNRPA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SNRPA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SNRPA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SNRPA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SNRPA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SNRPA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SNRPA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SNRPA en células tumorales con expresión de SNRPA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.