SNRPA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404128-ACT

SNRPA codifica a proteína A do pequeno ribonucleoproteína nuclear U1, um componente central do snRNP U1 que reconhece sítios doador 5′ de splicing e inicia a montagem do espliceossomo durante o splicing do pré‑mRNA. Por seu papel na seleção de sítios de splicing e no acoplamento entre transcrição e processamento de RNA, SNRPA ajuda a manter a integridade do proteoma e programas regulados de expressão gênica. A perturbação de proteínas do espliceossomo como SNRPA pode remodelar paisagens de splicing alternativo, influenciando vias que incluem vigilância de RNA e controle do ciclo celular. A desregulação da maquinaria de splicing é frequentemente observada tanto na biologia tumoral quanto em contextos neurodegenerativos, tornando SNRPA um alvo útil para estudar estresse de processamento de RNA e dependência do espliceossomo em células humanas.

SNRPA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SNRPA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SNRPA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SNRPA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SNRPA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SNRPA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SNRPA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SNRPA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SNRPA em células tumorais com expressão de SNRPA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.