SMPDL3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-430315

概要

Smpdl3bは、細胞表面におけるスフィンゴ脂質およびリン脂質代謝の制御に関与するとされる膜結合性ホスホジエステラーゼ、sphingomyelin phosphodiesterase acid-like 3B（SMPDL3B）をコードしています。SMPDL3Bは、膜脂質組成や受容体の配置（オーガナイゼーション）への作用を介して、Toll様受容体シグナルの調節、マクロファージの活性化状態、ならびに炎症応答の恒常性維持に関与することが示唆されています。マウスの免疫および腎臓の研究では、SMPDL3B活性の変化が自然免疫応答性やポドサイト機能の変化と関連づけられており、脂質リモデリングが組織障害や炎症と結びつくことが示されています。そのためSmpdl3bは、脂質シグナル、エンドリソソーム輸送、そして炎症性・代謝性疾患モデルに関連する免疫細胞表現型が交差する経路において、しばしば研究対象となります。

SMPDL3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSmpdl3b遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Smpdl3b内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Smpdl3bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SMPDL3Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SMPDL3Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Smpdl3b欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SMPDL3Bの機能に不可欠なSmpdl3bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Smpdl3bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SMPDL3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSMPDL3B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Smpdl3b遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SMPDL3B HDRプラスミド（m）および SMPDL3B HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSmpdl3bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSmpdl3b標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。