Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SMP30 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401934
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SMP30 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SMP30, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SMP30 Anticuerpo (E-11): sc-390098
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SMP30 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401934 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen humano **RGN** codifica la proteína marcadora de senescencia 30 (**SMP30/Regucalcina**), una proteína de unión al calcio implicada en la homeostasis celular del calcio, el equilibrio redox y la regulación metabólica. SMP30 se ha relacionado con la modulación de la señalización intracelular dependiente de Ca2+, la función mitocondrial y las respuestas al estrés oxidativo, procesos que influyen en la supervivencia celular y en fenotipos asociados al envejecimiento. Se han descrito alteraciones en la expresión de RGN/SMP30 en contextos que involucran el metabolismo hepático, el estrés inflamatorio y la biología tumoral, lo que la hace relevante para analizar vías que acoplan la señalización del calcio con la adaptación celular al estrés. Estudiar la pérdida o desregulación de RGN puede aportar información sobre mecanismos de senescencia, capacidad de detoxificación y reprogramación metabólica en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SMP30 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen RGN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del RGN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de RGN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SMP30.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en RGN para la investigación de la señalización de SMP30, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de RGN críticos para la función de SMP30
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de RGN para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SMP30 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SMP30 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus RGN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SMP30 (h) y el plásmido HDR SMP30 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología RGN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana RGN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.