SMG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404760-ACT

SMG1 codifica uma quinase de serina/treonina relacionada à PI3K que atua como um componente central da via de degradação de mRNA mediada por nonsense (NMD), fosforilando a UPF1 e coordenando a vigilância de transcritos que contêm códons de terminação prematuros. Por meio da regulação da estabilidade e da tradução de mRNAs, a SMG1 contribui para a proteostase, as respostas celulares ao estresse e programas de integridade genômica que se cruzam com a sinalização de dano ao DNA e o controle do ciclo celular. Alterações na NMD dependente de SMG1 podem remodelar o controle de qualidade do transcriptoma, influenciando estados de diferenciação e redes de expressão gênica adaptativas ao estresse. A atividade desregulada de SMG1 tem sido associada a fenótipos de vigilância de RNA e de sinalização alterados observados em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico para estudar o metabolismo de RNA e vias relacionadas ao estresse.

SMG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMG1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMG1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMG1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMG1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMG1 em células tumorais com expressão de SMG1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.