Smad8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402119-ACT

SMAD9 codifica a Smad8, uma SMAD regulada por receptor que transduz sinais de proteínas morfogenéticas ósseas (BMP) a jusante de receptores quinase de serina/treonina dos tipos I/II. Após a ativação do receptor de BMP, a Smad8 é fosforilada, forma complexos com a SMAD4 e se acumula no núcleo para modular programas transcricionais que controlam a especificação do destino celular, a diferenciação e a homeostase tecidual. As saídas da via BMP/TGF-β reguladas por SMAD9 se cruzam com redes de padronização do desenvolvimento e de genes osteogênicos, tornando o SMAD9 um alvo frequente em estudos de biologia do esqueleto e de comprometimento de linhagens. A desregulação da sinalização BMP–SMAD envolvendo SMAD9 tem sido associada a fenótipos de desenvolvimento e cardiopulmonares em humanos e é amplamente relevante para pesquisas sobre fibrose, inflamação e sinalização no microambiente tumoral, sem implicar desfechos clínicos.

Smad8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SMAD9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Smad8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SMAD9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SMAD9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Smad8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SMAD9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Smad8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Smad8 em células tumorais com expressão de SMAD9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.