Smad6 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401411-NIC

SMAD6はSmad6（抑制性SMAD）をコードしており、受容体調節型SMADのリン酸化および下流の転写複合体形成を阻害することで、BMPおよびTGF-βスーパーファミリーのシグナル伝達に拮抗します。BMP依存的なプログラムを減弱させることで、Smad6は骨芽細胞への分化、血管および心臓の形態形成の制御、さらに状況に応じた炎症反応や細胞外マトリックス応答の調節に寄与します。SMAD6活性の変化は、先天性の心血管および頭蓋顔面の表現型や、BMP/TGF-βのバランスが重要となる組織リモデリング過程の制御異常と関連することが報告されています。負のフィードバック制御因子として、SMAD6はしばしば、経路の閾値、シグナル持続時間、ならびにMAPKとのクロストークや、ユビキチン介在性のシグナル構成要素の分解・ターンオーバーを明らかにする目的で研究されています。

Smad6 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SMAD6 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SMAD6内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SMAD6の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SMAD6が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。