Slit3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402553-ACT

ヒトのSLIT3は、分泌型のガイダンス因子であるSlit3をコードしており、主としてROBO受容体を介してシグナルを伝達し、方向性のある細胞遊走、軸索誘導、ならびに組織パターニングを制御します。Slit3–ROBOシグナル伝達は、細胞骨格のリモデリングや低分子量GTPase依存性の過程と交差し、発生および組織恒常性の維持における細胞運動性と細胞配置の形成に関与します。非神経系の文脈では、SLIT3は血管および骨格の生物学とも関連づけられており、パラクラインコミュニケーションを通じて血管新生応答や骨形成性リモデリングに影響を及ぼします。SLIT3の発現またはシグナル伝達の異常は、浸潤・遊走表現型の変化や腫瘍微小環境のリモデリングと関連していることが報告されており、転移関連経路や間質—上皮相互作用の研究における機構的ノードとしての有用性を支持します。

Slit3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLIT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Slit3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLIT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLIT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Slit3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLIT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSlit3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLIT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSlit3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。