SLC35A3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-417814-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SLC35A3 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SLC35A3ダブルニカースプラスミド（h）およびSLC35A3ダブルニカースプラスミド（h2）は、SLC35A3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SLC35A3 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-417814-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SLC35A3 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-417814-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC35A3は、ゴルジ体および小胞体（ER）に局在するヌクレオチド糖トランスポーターをコードしており、UDP-N-アセチルグルコサミン（UDP-GlcNAc）を内腔へ取り込むことで、N型糖鎖付加、O型糖鎖付加、ならびに糖脂質生合成を支えます。糖転移酵素に供給される基質の可用性を制御することで、SLC35A3はタンパク質のフォールディングや輸送、受容体シグナル伝達や細胞間相互作用を調節する細胞表面糖鎖組成に影響を与えます。UDP-GlcNAc輸送の破綻は、プロテオスタシスや糖鎖依存性経路を攪乱し得るため、SLC35A3は先天性糖鎖付加異常症（CDG）や、神経発達および代謝恒常性に関わるより広範な表現型と関連づけられています。また、ヘキソサミン／糖鎖付加軸における中心的役割から、ヒト細胞において栄養感知が糖鎖リモデリングとどのように結びつくかを研究するうえでも重要です。
SLC35A3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SLC35A3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SLC35A3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SLC35A3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SLC35A3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。