SLC12A8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431364-ACT

Slc12a8 codifica a SLC12A8, um membro da família solute carrier 12 (SLC12) de transportadores acoplados a cátions, que regula gradientes iônicos de membrana e contribui para a homeostase osmótica epitelial e celular. Por meio da modulação do fluxo acoplado de Na⁺/K⁺/Cl⁻ e das forças motrizes eletroquímicas relacionadas, a SLC12A8 pode influenciar o controle do volume celular, processos de transporte transepitelial e a sinalização subsequente ligada a vias metabólicas e responsivas ao estresse. A atividade alterada de transportadores SLC12 é frequentemente associada a perturbações no equilíbrio eletrolítico e na fisiologia dos tecidos, tornando o Slc12a8 um alvo útil para investigar mecanismos dependentes de transportadores em contextos normais e relevantes para doenças. Em modelos murinos, a regulação de Slc12a8 pode ser explorada para estudar como o transporte de íons se conecta com a função de barreira, a inflamação e a adaptação metabólica.

SLC12A8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slc12a8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SLC12A8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slc12a8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slc12a8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SLC12A8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slc12a8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SLC12A8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SLC12A8 em células tumorais com expressão de Slc12a8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.