SKIV2L2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411757-ACT

SKIV2L2 (também conhecido como MTR4) codifica uma helicase de RNA SF2 conservada que atua como um cofator central do exossomo nuclear de RNA, promovendo a remodelação dependente de ATP de complexos ribonucleoproteicos para permitir a vigilância e a degradação de RNAs. É essencial para o processamento e o controle de qualidade de rRNA, snoRNA, snRNA e de múltiplas classes de RNAs não codificantes, além de sustentar a homeostase nucleolar e a biogênese de ribossomos. Por meio de interações com complexos adaptadores, como complexos do tipo TRAMP, a SKIV2L2 ajuda a direcionar transcritos aberrantes ou indesejados para vias de degradação mediadas pelo exossomo. A desregulação do metabolismo de RNA ligado à SKIV2L2 tem sido associada a programas de expressão gênica alterados e a fenótipos de estresse celular, frequentemente estudados na biologia do câncer e em distúrbios de processamento de RNA.

SKIV2L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SKIV2L2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SKIV2L2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SKIV2L2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SKIV2L2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SKIV2L2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SKIV2L2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SKIV2L2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SKIV2L2 em células tumorais com expressão de SKIV2L2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.