Six6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405096-ACT

SIX6 は、ホメオボックス型転写因子 Six6 をコードしており、胚発生期の眼および前脳の発達、ならびに神経網膜細胞のアイデンティティ維持に必須の、核内DNA結合性の制御因子です。Six6 は、前駆細胞の増殖、細胞周期のタイミング、系譜（ラインage）決定を制御する遺伝子発現プログラムを調節し、WNT、SHH、BMP などのシグナルを含む発生シグナルネットワークと連携して機能します。SIX6 の発現量（用量）の変化や制御領域の変異は、視神経乳頭や網膜の発生異常といった眼の表現型、ならびに緑内障関連形質の遺伝学的リスクと関連づけられており、神経発達および眼疾患の病態理解における重要性を支持しています。転写制御因子としての Six6 は、網膜分化、神経細胞の運命決定、遺伝子制御ネットワーク構造のモデル研究で頻繁に解析されています。

Six6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SIX6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Six6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SIX6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSIX6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Six6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSIX6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSix6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSIX6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSix6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。