Plasmide CRISPR d'Activation (h) Six6: sc-405096-ACT

SIX6 code le facteur de transcription à homéoboîte Six6, un régulateur nucléaire se liant à l’ADN, essentiel au développement embryonnaire de l’œil et du prosencéphale, ainsi qu’au maintien de l’identité des cellules neurorétiniennes. Six6 module des programmes d’expression génique qui contrôlent la prolifération des progéniteurs, le calendrier du cycle cellulaire et la spécification des lignages, en interaction avec des réseaux de signalisation du développement comprenant notamment les voies WNT, SHH et BMP. Des modifications du dosage de SIX6 ou des variations régulatrices ont été associées à des phénotypes oculaires tels que des anomalies du développement de la papille du nerf optique et de la rétine, ainsi qu’à un risque génétique accru de traits liés au glaucome, ce qui étaye sa pertinence pour la neurobiologie du développement et les maladies oculaires. En tant que régulateur transcriptionnel, Six6 est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation rétinienne, de choix de destin neuronal et d’architecture des réseaux de régulation génique.

Six6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIX6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Six6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIX6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIX6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Six6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIX6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Six6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Six6 dans les cellules tumorales présentant une expression de SIX6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.