Plásmido CRISPR de Activación (m) SIRT6: sc-424467-ACT

El gen murino **Sirt6** codifica **SIRT6**, una desacetilasa/deacilasa nuclear dependiente de **NAD+** que regula la estructura de la cromatina y la transcripción mediante actividades de **desacetilación de la histona H3** y **ADP-ribosilación**. SIRT6 integra la detección metabólica con el mantenimiento del genoma al modular la reparación de roturas de doble cadena del ADN, la estabilidad de los telómeros y las respuestas al estrés de replicación, y también influye en el metabolismo de la glucosa y los lípidos a través del control de programas génicos glucolíticos e inflamatorios. Funcionalmente, SIRT6 se cruza con vías que incluyen la señalización de **NF-κB**, las respuestas al estrés oxidativo y la remodelación de la cromatina, moldeando el envejecimiento celular y la resiliencia frente al estrés. La actividad desregulada de SIRT6 se ha vinculado en investigaciones con fenotipos asociados a la edad, desequilibrio metabólico y estados inflamatorios, lo que la convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos en sistemas murinos.

SIRT6 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Sirt6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SIRT6 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Sirt6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Sirt6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SIRT6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Sirt6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SIRT6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SIRT6 en células tumorales con expresión de Sirt6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.