SIRT6 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424467-ACT

マウスSirt6はSIRT6をコードしており、SIRT6は核内に局在するNAD+依存性の脱アシル化酵素で、ヒストンH3の脱アセチル化およびADPリボシル化活性を介してクロマチン構造と転写を制御します。SIRT6はDNA二本鎖切断修復、テロメアの安定性、複製ストレス応答を調節することで、代謝シグナルの感知とゲノム維持を統合し、解糖系および炎症関連遺伝子プログラムの制御を通じて糖・脂質代謝にも影響を与えます。機能的には、NF-κBシグナル伝達、酸化ストレス応答、クロマチンリモデリングに関わる経路と交差し、細胞老化やストレス耐性の形成に寄与します。SIRT6活性の破綻は、研究において加齢関連表現型、代謝バランスの崩れ、炎症状態と関連づけられており、マウス系における機構解析の重要な結節点となっています。

SIRT6 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sirt6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SIRT6 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sirt6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSirt6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SIRT6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSirt6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSIRT6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSirt6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSIRT6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。