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SIRT5双切口酶质粒(r) | sc-437317-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT5双切口酶质粒(r2) | sc-437317-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIRT5 是线粒体内一种依赖 NAD⁺ 的赖氨酸去酰化酶,属于 sirtuin 家族,优先去除代谢酶上的琥珀酰化(succinyl)、丙二酰化(malonyl)和戊二酰化(glutaryl)等修饰。通过调控酰化状态,SIRT5 影响中心碳代谢,包括尿素循环、脂肪酸氧化、三羧酸(TCA)循环通量,以及通过调节线粒体酶活性来影响氧化应激反应。在大鼠体系中,改变 SIRT5 功能常用于探究线粒体蛋白稳态与生物能量重编程之间的关联,尤其是在与代谢应激和组织损伤相关的状态下。这些通路常在线粒体蛋白翻译后酰化动态可能影响细胞抗逆性的模型中被研究,例如肝脏代谢、心脏能量学以及神经炎症等模型。
SIRT5 双切酶质粒(r)由一对匹配的质粒组成,专为在 rat 细胞系中对 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。