SIRT2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400590-NIC

SIRT2は、主に細胞質に局在するNAD⁺依存性デアセチラーゼをコードしており、微小管動態、細胞周期の進行、細胞ストレス応答を制御するタンパク質のアセチル化状態を調節します。α-チューブリンや代謝調節因子などの基質を脱アセチル化することで、SIRT2は細胞骨格のリモデリング、有糸分裂の忠実性、代謝適応の協調に寄与し、その活性はNAD⁺の利用可能性や酸化還元バランスの影響を受ける経路と結び付いています。SIRT2機能の変化は、アセチル化依存的なシグナル伝達の変動が分化、生存、ゲノム安定性に影響し得る神経変性、炎症、がん関連表現型の文脈で検討されてきました。サーチュインファミリーの一員として、SIRT2は栄養感知と、エピジェネティック制御および翻訳後修飾による細胞プログラムの制御を統合する役割の観点から、しばしば研究されています。

SIRT2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SIRT2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SIRT2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SIRT2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SIRT2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。