SIRP-α Double Nickaseプラスミド (m): sc-422514-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SIRP-α Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SIRP-αダブルニカースプラスミド（m）およびSIRP-αダブルニカースプラスミド（m2）は、Sirpaを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SIRP-α 抗体 (C-7): sc-376884
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SIRP-α Double Nickaseプラスミド (m) | sc-422514-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRP-α Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-422514-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスのSirpaは、シグナル制御タンパク質α（SIRP-α）をコードしており、主に骨髄系細胞に発現する免疫グロブリンスーパーファミリー受容体で、貪食に対する抑制性チェックポイントとして機能します。SIRP-αはCD47との結合を介して、ITIMモチーフからのシグナル伝達によりSHP-1/2ホスファターゼをリクルートし、細胞骨格の再編成、インテグリンシグナル、ならびに取り込みや炎症トーンを制御する自然免疫活性化経路を抑制します。この軸はマクロファージおよび樹状細胞の恒常性、抗原の取り扱い、アポトーシス細胞の除去に影響し、腫瘍の免疫回避、移植免疫、自己免疫／炎症性表現型などの文脈で広く研究されています。さらに、マウスSIRP-αの系統差やアレル依存的な違いは、異種移植片の適合性や自然免疫応答にも影響し得るため、Sirpaは免疫学および疾患モデル開発において頻繁に標的となります。
SIRP-α ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Sirpa 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Sirpa内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Sirpaの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Sirpaが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。