SIP1/ZEB2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400655-ACT

ZEB2, também conhecido como SIP1, é um fator de transcrição com dedos de zinco que se liga a E-box e regula a transição epitélio–mesênquima (EMT) ao reprimir programas gênicos epiteliais, incluindo CDH1, e ao coordenar o destino celular e a diferenciação. Por meio de suas interações com proteínas SMAD, SIP1/ZEB2 integra a sinalização de TGF-β/BMP com o remodelamento da cromatina para controlar a especificação de linhagem, a migração e o padrão de desenvolvimento. A atividade de ZEB2 molda o desenvolvimento da crista neural e do sistema hematopoético e modula a diferenciação de células imunes, conectando-o a vias que governam a morfogênese tecidual e respostas inflamatórias. A desregulação de redes transcricionais associadas a ZEB2 tem sido implicada em distúrbios do desenvolvimento e em programas de plasticidade celular relevantes para a progressão tumoral e fenótipos associados à metástase.

SIP1/ZEB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZEB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIP1/ZEB2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZEB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZEB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIP1/ZEB2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZEB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIP1/ZEB2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIP1/ZEB2 em células tumorais com expressão de ZEB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.