SIM2s Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405609-ACT

O SIM2 humano (single-minded family bHLH transcription factor 2) codifica isoformas, incluindo o SIM2s, um regulador transcricional do tipo hélice–alça–hélice básica (bHLH) com domínio PAS que forma heterodímeros com ARNT e se liga a elementos semelhantes a intensificadores (enhancers) da linha média do SNC para modular programas de expressão gênica. O SIM2s contribui para a especificação de linhagem e a diferenciação, influenciando redes transcricionais associadas ao desenvolvimento, à identidade epitelial e à homeostase celular. Alterações na expressão de SIM2/SIM2s foram relatadas em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo tumores sólidos e fenótipos do neurodesenvolvimento, nos quais pode interagir com vias responsivas à hipóxia, associadas ao receptor de hidrocarbonetos arílicos e com vias mais amplas de controle transcricional. Essas propriedades tornam o SIM2s um nó útil para estudar a regulação transcricional dependente do contexto e o remodelamento de vias a jusante.

SIM2s O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIM2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIM2s O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIM2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIM2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIM2s. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIM2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIM2s no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIM2s em células tumorais com expressão de SIM2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.