SIAE CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423745

概要

マウスSIAE（シアル酸アセチルエステラーゼ）遺伝子は、シアル酸からO-アセチル基を除去し、糖タンパク質や糖脂質上のグリカン構造を改変するリソソーム／分泌型エステラーゼをコードしています。シアル化リガンドのアセチル化状態を調節することで、SIAEはレクチン介在性の認識イベントおよび細胞表面での下流シグナル伝達に影響を与え、免疫細胞の恒常性維持と深く関わります。シアル酸修飾の変化は、B細胞受容体（BCR）のシグナル伝達閾値、免疫寛容のチェックポイント、炎症応答の変動と関連しており、Siaeは自己免疫や免疫調節異常の研究における有用な標的となります。さらに、SIAE依存的なグリカン編集はエンドソーム／リソソームでの処理や受容体トラフィッキングを制御する経路とも交差するため、グライコバイオロジーおよび免疫代謝の研究にも役立ちます。

SIAE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSiae遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Siae内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Siaeのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SIAEタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SIAEシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Siae欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SIAEの機能に不可欠なSiaeエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Siaeゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SIAE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSIAE CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Siae遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SIAE HDRプラスミド（m）および SIAE HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSiaeホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSiae標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。