Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SHIP-2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421138-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SHIP-2 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SHIP-2ダブルニカースプラスミド（m）およびSHIP-2ダブルニカースプラスミド（m2）は、Inppl1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SHIP-2 抗体 (E-2): sc-166641
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SHIP-2 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-421138-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SHIP-2 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-421138-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Inppl1は、SHIP-2（SH2ドメイン含有イノシトール5-ホスファターゼ2）をコードする。SHIP-2は脂質ホスファターゼであり、PI(3,4,5)P3をPI(3,4)P2へ変換することで、受容体型チロシンキナーゼや免疫受容体の下流におけるホスホイノシチドシグナル伝達を調節する。細胞膜でのPI3K–AKT経路のシグナル強度（振幅）や空間的なシグナル伝達を制御することにより、SHIP-2はインスリンシグナル、グルコース恒常性、細胞接着、ならびに細胞骨格ダイナミクスに影響を及ぼす。マウス組織では、SHIP-2活性が代謝制御および炎症性シグナルに関連するとされ、INPPL1/SHIP-2機能の変化は、インスリン抵抗性、肥満関連表現型、がんに伴うシグナル伝達ネットワークの再配線などの文脈で研究されている。これらの役割により、Inppl1は成長因子シグナル、エンドサイトーシス、アクチン再構成の間の経路クロストークを解析する上で有用な結節点となる。
SHIP-2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Inppl1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Inppl1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Inppl1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Inppl1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。