Shank 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403064-ACT

SHANK1 codifica a Shank 1, uma proteína de ancoragem (scaffold) multidomínio enriquecida na densidade pós-sináptica de sinapses excitatórias, onde organiza complexos de sinalização glutamatérgica. Ao conectar receptores e canais a proteínas reguladoras de actina e de sinalização, a Shank 1 sustenta a formação de sinapses, a morfologia das espinhas dendríticas e a plasticidade sináptica dependente de atividade. SHANK1 participa de vias que regulam a arquitetura pós-sináptica e a neurotransmissão, incluindo complexos centrados em receptores NMDA/AMPA e processos a jusante envolvendo pequenas GTPases e remodelamento do citoesqueleto. Alterações genéticas e funcionais em proteínas scaffold da família SHANK estão associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuropsiquiátricos, tornando SHANK1 um alvo para estudos mecanísticos de disfunção sináptica.

Shank 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SHANK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Shank 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SHANK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SHANK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Shank 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SHANK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Shank 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Shank 1 em células tumorais com expressão de SHANK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.