SGK Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422906-ACT

O gene Sgk1 de camundongo codifica a quinase regulada por soro/glicocorticoides (SGK), uma quinase de serina/treonina da família AGC induzida por glicocorticoides, fatores de crescimento e estresse celular. A SGK integra a sinalização PI3K–PDK1 com a regulação a jusante de transportadores e canais iônicos, programas transcricionais e vias de sobrevivência, incluindo a modulação da expressão gênica dependente de FOXO e a comunicação cruzada com o sensor de nutrientes relacionado ao mTOR. Por meio desses processos, influencia o transporte epitelial de sódio, as respostas ao estresse osmótico e oxidativo e a progressão do ciclo celular. A atividade desregulada de SGK tem sido associada a remodelamento patológico e a contextos de sinalização inflamatória, tornando o Sgk1 um ponto útil para estudos mecanísticos de vias de adaptação ao estresse em tecidos de mamíferos.

SGK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sgk1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SGK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sgk1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sgk1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SGK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sgk1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SGK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SGK em células tumorais com expressão de Sgk1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.