Set1B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431532

Übersicht

Setd1b kodiert die Histon-Lysin-Methyltransferase Set1B, eine zentrale Komponente COMPASS-ähnlicher chromatinmodifizierender Komplexe, die die H3K4-Methylierung an aktiven Promotoren und regulatorischen Elementen katalysieren. Durch die Modulation der H3K4me1/2/3-Zustände hilft Set1B, die Transkriptionsinitiation, die Aktivität der RNA-Polymerase II und die epigenetische Aufrechterhaltung zelltypspezifischer Identitätsprogramme zu koordinieren. Die Setd1b-abhängige Chromatinregulation ist mit Entwicklungs- und neuronalen Genexpressionsnetzwerken verknüpft, und eine veränderte SETD1B-Funktion wird mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie einer breiteren, für die Krankheitsbiologie relevanten epigenetischen Dysregulation in Verbindung gebracht. In Mausmodellen stellt Set1B ein gut handhabbares Ziel dar, um zu untersuchen, wie promotorassoziierte Histonmethylierung signalabhängige Transkription und genomeweite Chromatinlandschaften prägt.

Das Set1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Setd1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Setd1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Setd1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Set1B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Setd1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Set1B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Setd1b-Exone abzielen, die für die Set1B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Setd1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Set1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Set1B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Setd1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Set1B HDR-Plasmid (m) und Set1B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Setd1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Setd1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.