Set1A Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-406841-LAC

O SETD1A humano codifica a Set1A, um componente catalítico do complexo COMPASS que deposita metilação na lisina 4 da histona H3, com papel proeminente na marca H3K4me3 em promotores ativos. Por meio da coordenação com a maquinaria transcricional da RNA polimerase II e com cofatores associados à cromatina, a Set1A ajuda a regular a acessibilidade da cromatina na região proximal ao promotor, o início da transcrição e programas de expressão gênica que controlam a proliferação e a especificação de linhagens celulares. A regulação de cromatina dependente de SETD1A intersecciona com a resposta a danos no DNA, a manutenção da cromatina associada à replicação e redes transcricionais do neurodesenvolvimento. A desregulação de SETD1A e de vias relacionadas de metiltransferases de H3K4 tem sido associada a alterações na homeostase transcricional e é frequentemente investigada em modelos de doenças neuropsiquiátricas e de remodelamento epigenético associado ao câncer.

As Partículas de Ativação Lentivirais Set1A (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SETD1A numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Set1A (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SETD1A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Set1A. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SETD1A e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.