SENP6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404246-ACT

SENP6 codifica uma protease específica de SUMO que remove modificações por SUMO de proteínas-alvo, moldando a homeostase de SUMO e regulando a estabilidade, a localização e a dinâmica de sinalização das proteínas. Por meio da desSUMOilação de substratos-chave, a SENP6 sustenta a integridade do genoma ao influenciar vias de resposta a danos no DNA, a organização da cromatina e a progressão do ciclo celular. A função da SENP6 também está ligada ao controle de processos associados ao centrômero e ao cinetócoro que garantem a segregação cromossômica correta. A atividade desregulada da via de SUMO, incluindo alterações na expressão ou na atividade de SENP6, é frequentemente estudada no contexto de instabilidade genômica e de fenótipos de resposta ao estresse relevantes para o câncer.

SENP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SENP6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SENP6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SENP6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SENP6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SENP6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SENP6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SENP6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SENP6 em células tumorais com expressão de SENP6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.