SEMA5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406519

概要

SEMA5Bは、膜貫通型のガイダンス因子であるセマフォリン5Bをコードしており、プレキシン受容体およびヘパラン硫酸プロテオグリカンとの相互作用を介して、細胞間コミュニケーション、細胞骨格の再構築、方向性移動を制御します。SEMA5Bシグナルは神経系における軸索ガイダンスやシナプス組織化に寄与し、RhoファミリーGTPase依存性経路を介して接着や運動性プログラムにも影響を与え得ます。セマフォリンシグナルの異常は、神経発達・神経精神疾患の表現型に加え、状況依存的に腫瘍細胞の浸潤や免疫微小環境の調節にも関与することが報告されています。そのため、SEMA5Bは神経回路の結合性、可塑性、ならびに遊走に関連する疾患生物学の機序研究において広く解析されています。

SEMA5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSEMA5B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SEMA5B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SEMA5Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SEMA5Bタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SEMA5Bシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SEMA5B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SEMA5Bの機能に不可欠なSEMA5Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SEMA5Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SEMA5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびSEMA5B CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SEMA5B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SEMA5B HDRプラスミド（h）および SEMA5B HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSEMA5Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSEMA5B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。