SEMA3G Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406077

Panoramica

SEMA3G codifica la semaforina-3G, un segnale guida secreto che trasmette segnali attraverso complessi recettoriali neuropilina/plexina per regolare il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e l’organizzazione dei tessuti. Oltre ai ruoli nella guida assonale e nel neurosviluppo, SEMA3G influenza la gemmazione angiogenica e linfatica e può modulare il comportamento delle cellule endoteliali e immunitarie tramite una segnalazione dipendente dalle semaforine. Questi processi si intrecciano con vie che controllano adesione, motilità e rimodellamento vascolare, rendendo SEMA3G un nodo rilevante per lo studio della biologia dello sviluppo e della regolazione della migrazione cellulare guidata dal microambiente. Alterazioni della segnalazione delle semaforine sono state associate alla progressione del cancro e a fenotipi legati alla metastasi, oltre che a disfunzioni vascolari e infiammatorie, a supporto dell’indagine di SEMA3G in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3G (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SEMA3G in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SEMA3G insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SEMA3G a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEMA3G.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SEMA3G per lo studio della segnalazione di SEMA3G, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SEMA3G critici per la funzione di SEMA3G
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SEMA3G per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEMA3G CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SEMA3G CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SEMA3G. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEMA3G Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SEMA3G (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SEMA3G per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SEMA3G definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.