SEMA3F Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403710-ACT

SEMA3F codifica la semaforina-3F, un segnale guida secreto che trasduce principalmente attraverso i recettori neuropilina e plexina per regolare il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare direzionale e la guida degli assoni. Nei tessuti non neuronali, SEMA3F partecipa a vie che controllano la comunicazione cellula–cellula, le dinamiche di adesione e la formazione dei pattern vascolari, collegandola a processi quali l’organizzazione dei tessuti e la segnalazione del microambiente. Un’espressione alterata di SEMA3F è stata associata a motilità disregolata e comportamento invasivo in ambito oncologico; inoltre è studiata in contesti di neurosviluppo e neuroinfiammazione, in cui i segnali guida modellano la formazione dei circuiti e il cross-talk immuno-neuronale. In quanto regolatore, attivato dal legame del ligando, della segnalazione delle semaforine, SEMA3F rappresenta un nodo accessibile per indagare programmi di guida e migrazione mediati da recettori.

SEMA3F Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEMA3F senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SEMA3F Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEMA3F nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEMA3F, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SEMA3F. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEMA3F nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SEMA3F nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SEMA3F nelle cellule tumorali con espressione di SEMA3F silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.