Plásmido CRISPR de Activación (h) SEMA3F: sc-403710-ACT

SEMA3F codifica la semaforina-3F, una señal guía secretada que actúa principalmente a través de receptores de neuropilina y plexina para regular la remodelación del citoesqueleto, la migración celular direccional y el guiado axonal. En tejidos no neuronales, SEMA3F participa en vías que controlan la comunicación célula–célula, la dinámica de la adhesión y el patrón vascular, lo que la vincula con procesos como la organización tisular y la señalización del microambiente. La expresión alterada de SEMA3F se ha asociado con una motilidad desregulada y un comportamiento invasivo en biología del cáncer, y también se estudia en contextos de neurodesarrollo y neuroinflamación, donde las señales guía moldean la formación de circuitos y el diálogo cruzado entre el sistema inmune y el neuronal. Como regulador dependiente de ligando de la señalización de semaforinas, SEMA3F constituye un nodo abordable para investigar programas de guiado y migración mediados por receptores.

SEMA3F El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEMA3F sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SEMA3F El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEMA3F en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEMA3F, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SEMA3F. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEMA3F y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SEMA3F en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SEMA3F en células tumorales con expresión de SEMA3F silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.