SEMA3F Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403710-ACT

SEMA3F codifica a semaforina-3F, um sinal de orientação secretado que atua principalmente por meio de receptores de neuropilina e plexina para regular a remodelação do citoesqueleto, a migração celular direcional e o direcionamento de axônios. Em tecidos não neuronais, a SEMA3F participa de vias que controlam a comunicação célula–célula, a dinâmica de adesão e o padrão de vascularização, associando-se a processos como a organização tecidual e a sinalização do microambiente. A expressão alterada de SEMA3F tem sido associada à motilidade desregulada e a comportamento invasivo na biologia do câncer, e também é estudada em contextos de neurodesenvolvimento e neuroinflamação, nos quais sinais de orientação moldam a formação de circuitos e a comunicação cruzada entre sistema imune e neurônios. Como regulador dependente de ligante da sinalização por semaforinas, a SEMA3F constitui um ponto acessível para investigar programas de orientação e migração mediados por receptores.

SEMA3F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEMA3F sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SEMA3F O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEMA3F em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEMA3F, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SEMA3F. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEMA3F nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SEMA3F no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SEMA3F em células tumorais com expressão de SEMA3F silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.