Partículas Lentivirales de Activación (h) SEMA3E: sc-404797-LAC

SEMA3E codifica la semaforina-3E, una señal de guía secretada que actúa principalmente a través de receptores plexina para regular la remodelación del citoesqueleto, la migración celular direccional y las interacciones célula–célula. En células humanas, SEMA3E influye en la guía axonal, el patrón vascular y la organización epitelial mediante la modulación de la señalización de GTPasas de la familia Rho y de vías posteriores que controlan la adhesión y la motilidad. La desregulación de la señalización de SEMA3E se ha vinculado con respuestas angiogénicas alteradas y fenotipos invasivos en múltiples contextos de cáncer, y también se estudia en procesos del neurodesarrollo y en la inflamación. Estas propiedades hacen de SEMA3E una diana útil para desentrañar mecanismos de señalización del microambiente, circuitos de migración y programas de guía mediados por receptores.

Las partículas de activación lentiviral SEMA3E (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SEMA3E en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SEMA3E (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SEMA3E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SEMA3E. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SEMA3E y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.