SEMA3E Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404797-ACT

SEMA3E codifica la semaforina-3E, un segnale guida secreto che agisce principalmente tramite recettori della famiglia delle plexine per regolare il rimodellamento del citoscheletro, la migrazione cellulare e la navigazione direzionale. Oltre al ruolo nella guida assonale, SEMA3E influenza la formazione del pattern vascolare e il comportamento endoteliale, integrandosi con vie di segnalazione che controllano la dinamica dell’adesione e l’attività delle GTPasi della famiglia Rho. Una segnalazione di SEMA3E deregolata è stata associata a variazioni del potenziale invasivo, delle risposte angiogeniche e del rimodellamento del microambiente tissutale in diversi contesti patologici, rendendola un nodo rilevante per lo studio della motilità e della segnalazione nello sviluppo. Queste funzioni rendono SEMA3E un utile punto di accesso molecolare per indagare come i segnali guida extracellulari plasmino le transizioni di stato cellulare e l’organizzazione dei tessuti.

SEMA3E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SEMA3E senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SEMA3E Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SEMA3E nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SEMA3E, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SEMA3E. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SEMA3E nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SEMA3E nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SEMA3E nelle cellule tumorali con espressione di SEMA3E silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.