SEMA3E Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404797-ACT

SEMA3E codifica a semaforina-3E, um sinalizador de orientação secretado que atua principalmente por meio de receptores plexina para regular a remodelação do citoesqueleto, a migração celular e a navegação direcional. Além de seu papel na orientação de axônios, SEMA3E influencia o padrão de vascularização e o comportamento endotelial, integrando-se a vias que controlam a dinâmica de adesão e a atividade de GTPases da família Rho. A desregulação da sinalização de SEMA3E tem sido associada a alterações no potencial invasivo, nas respostas angiogênicas e na remodelação do microambiente tecidual em múltiplos contextos de doença, o que a torna um ponto relevante para o estudo de motilidade e sinalização do desenvolvimento. Essas funções posicionam SEMA3E como uma ferramenta molecular útil para investigar como sinais extracelulares de orientação moldam transições de estado celular e a organização dos tecidos.

SEMA3E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEMA3E sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SEMA3E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEMA3E em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEMA3E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SEMA3E. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEMA3E nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SEMA3E no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SEMA3E em células tumorais com expressão de SEMA3E silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.