Plásmido CRISPR de Activación (h) SEMA3E: sc-404797-ACT

SEMA3E codifica la semaforina-3E, una señal de guía secretada que transmite señales principalmente a través de receptores plexina para regular la remodelación del citoesqueleto, la migración celular y la navegación direccional. Además de sus funciones en la guía axonal, SEMA3E influye en el patrón vascular y en el comportamiento endotelial, integrándose con vías que controlan la dinámica de adhesión y la actividad de las GTPasas de la familia Rho. La señalización desregulada de SEMA3E se ha asociado con cambios en el potencial invasivo, en las respuestas angiogénicas y en la remodelación del microambiente tisular en múltiples contextos patológicos, lo que la convierte en un nodo relevante para estudiar la motilidad y la señalización del desarrollo. Estas funciones sitúan a SEMA3E como una herramienta molecular útil para investigar cómo las señales de guía extracelulares moldean las transiciones de estado celular y la organización tisular.

SEMA3E El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SEMA3E sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SEMA3E El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SEMA3E en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SEMA3E, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SEMA3E. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SEMA3E y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SEMA3E en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SEMA3E en células tumorales con expresión de SEMA3E silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.