SEMA3D Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403924-ACT

SEMA3D codifica a semaforina 3D, um sinalizador de orientação secretado que transmite sinais por meio de complexos de receptores neuropilina e plexina para regular a remodelação do citoesqueleto, a migração celular direcional e o direcionamento de axônios. Em tecidos humanos, SEMA3D contribui para o padrão tecidual e para a organização de redes vasculares e neurais ao modular a atividade de GTPases da família Rho e a adesão dependente de integrinas. A desregulação da sinalização por semaforinas está associada a alterações na motilidade celular e nas interações com o microambiente observadas em diversos distúrbios do desenvolvimento e processos relacionados ao câncer, tornando SEMA3D um nó útil para estudar invasão, angiogênese e conectividade neural. Pesquisadores frequentemente investigam a função de SEMA3D em vias que governam a sinalização de orientação, a dinâmica epitélio–mesênquima e a regulação dependente do contexto de respostas a fatores de crescimento e à matriz extracelular.

SEMA3D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SEMA3D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SEMA3D O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SEMA3D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SEMA3D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SEMA3D. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SEMA3D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SEMA3D no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SEMA3D em células tumorais com expressão de SEMA3D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.