secretin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422831-ACT

O gene **Sct** de camundongo codifica a **secretina**, um hormônio peptídico produzido principalmente por células enteroendócrinas S no duodeno, que coordena a fisiologia digestiva e metabólica. A secretina sinaliza por meio do **receptor de secretina** (um GPCR de classe B) para ativar a **adenilato ciclase** e as vias **cAMP/PKA**, regulando a secreção pancreática de bicarbonato, o fluxo biliar e a inibição do ácido gástrico, além de contribuir para a homeostase de água e eletrólitos. No sistema nervoso, a secretina tem sido implicada em processos neuromodulatórios, incluindo efeitos sobre a atividade sináptica e a sinalização hipotálamo–hipófise. A desregulação da sinalização secretina/receptor de secretina é estudada em contextos como disfunção gastrointestinal, insuficiência exócrina pancreática, processos colestáticos e perturbações de vias neuroendócrinas.

secretin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sct sem alterar a sequência de ADN subjacente.

secretin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sct em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sct, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de secretin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sct nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de secretin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via secretin em células tumorais com expressão de Sct silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.