SEC13 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403302

Übersicht

SEC13 kodiert Sec13, eine zentrale Komponente des COPII-Mantels, die mit Sec31 zusammenarbeitet, um das äußere Gerüst zu bilden, das für die Abschnürung von Vesikeln aus dem endoplasmatischen Retikulum sowie für den ER-zu-Golgi-Transport erforderlich ist. Über den sekretorischen Transport hinaus ist Sec13 auch an der Architektur des Kernporenkomplexes beteiligt und unterstützt die Proteostase, indem es den Cargo-Export und ER-Stressantworten beeinflusst. Diese Funktionen verknüpfen SEC13 mit Signal- und Funktionswegen, die Membranremodellierung, Proteinsekretion und die Homöostase intrazellulärer Kompartimente steuern. Eine Dysregulation der Kapazität des sekretorischen Weges und des nukleären Transports wird in Studien zur Anpassung an zellulären Stress und zu proliferativen Signalwegen in krankheitsrelevanten Kontexten häufig genutzt.

Das SEC13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SEC13-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SEC13-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SEC13 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SEC13-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SEC13-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SEC13-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SEC13-Exone abzielen, die für die SEC13-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SEC13-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SEC13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SEC13 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SEC13-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SEC13 HDR-Plasmid (h) und SEC13 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SEC13-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SEC13-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.