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Scleraxis慢病毒激活颗粒(m) | sc-422833-LAC | 200 µl | $455.00 |
小鼠 Scx 编码硬腱蛋白(scleraxis),这是一种碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子,作为肌腱和韧带成纤维细胞的谱系决定因子,并调控细胞外基质(ECM)相关基因程序,包括纤维型胶原和蛋白聚糖。硬腱蛋白整合机械转导以及 TGF-β/BMP 信号通路,在发育与修复过程中控制肌腱细胞分化、基质重塑和组织成熟。Scx 活性改变与肌腱稳态紊乱、腱骨附着点(enthesis)形成受损以及纤维化重塑过程相关,这些过程与肌肉骨骼退变和异常结缔组织结构密切相关。作为 ECM 组织的转录调控因子,硬腱蛋白在肌腱损伤、纤维化以及基质/间质细胞命运决定等模型中被广泛研究。
Scleraxis 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Scx 表达。
Scleraxis 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Scx转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Scleraxis表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Scx 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。