SCD5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402860-ACT

SCD5 codifica a estearoil‑CoA dessaturase 5, uma enzima associada ao retículo endoplasmático que introduz uma dupla ligação cis em acil‑CoAs de ácidos gordos saturados, gerando ácidos gordos monoinsaturados. Ao moldar a composição lipídica das membranas e fornecer substratos para a síntese de lípidos complexos, a SCD5 influencia a homeostase lipídica, a dinâmica das membranas e redes de sinalização metabólica ligadas à remodelação lipídica. Alterações na atividade das dessaturases podem modificar as respostas celulares ao stress e a sinalização dependente de lípidos, tornando a SCD5 um alvo relevante para estudar a regulação metabólica em tecidos onde o manuseamento de lípidos é rigorosamente controlado. Padrões desregulados de dessaturação de ácidos gordos têm sido associados a fenótipos relevantes para doenças em perturbações metabólicas e na biologia do cancro, apoiando a investigação da SCD5 no contexto de perturbações específicas de vias lipídicas.

SCD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCD5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCD5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCD5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCD5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCD5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCD5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCD5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCD5 em células tumorais com expressão de SCD5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.