SCD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422809-ACT

O gene Scd1 de camundongo codifica a estearoil‑CoA dessaturase 1 (SCD1), uma enzima microssomal que introduz uma dupla ligação Δ9 em acil‑CoAs de ácidos graxos saturados para gerar ácidos graxos monoinsaturados, como oleato e palmitoleato. Ao controlar o equilíbrio entre lipídios saturados e insaturados, a SCD1 influencia a fluidez de membrana, a síntese de triglicerídeos e de ésteres de colesterol, a formação de gotículas lipídicas e a sinalização por meio de programas lipogênicos, incluindo vias reguladas por SREBP1. A atividade de Scd1 afeta a homeostase metabólica e as respostas ao estresse celular, conectando a capacidade de dessaturação alterada à obesidade, à resistência à insulina, à esteatose hepática, à inflamação e a efeitos dependentes do contexto no metabolismo lipídico de células cancerosas. Em modelos murinos, Scd1 é frequentemente utilizado para investigar remodelamento lipídico, estresse do RE e redes transcricionais responsivas a nutrientes.

SCD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Scd1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Scd1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Scd1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Scd1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCD1 em células tumorais com expressão de Scd1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.