SC CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402459-ACT

ポリマー免疫グロブリン受容体（PIGR）は、分泌成分（SC）をコードしている。SCは膜貫通型受容体で、上皮細胞の基底外側膜表面で二量体IgAおよび五量体IgMに結合し、それらを上皮を横断して輸送して粘膜分泌へと導く。トランスサイトーシスの過程でSCはプロテアーゼにより切断されて遊離するが、分泌型IgAに結合したまま残り、免疫学的排除を高めるとともに、粘膜環境における抗体のプロテオリシスからの保護に寄与する。PIGRの発現は、NF-κB経路やJAK/STAT経路を含む炎症性・サイトカイン駆動性シグナルにより制御され、上皮の自然免疫応答と獲得粘膜免疫を結び付けている。PIGR/SCの生物学的機能の破綻は、バリア機能不全や慢性炎症の文脈で研究されており、感染感受性や上皮性腫瘍の微小環境における相互作用への影響が示唆されている。

SC CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PIGRの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SC CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PIGR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPIGR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPIGR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSC依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPIGR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSC経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。