SART-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411332-ACT

O gene humano SART3 codifica a SART-3, uma proteína nuclear de ligação a RNA implicada na montagem e na reciclagem do spliceossoma, apoiando a dinâmica das snRNPs U4/U6 e a fidelidade do splicing de pré-mRNA. Por meio de suas funções no processamento de RNA e na organização nuclear, a SART-3 contribui para a regulação de programas de expressão gênica que influenciam a progressão do ciclo celular, as respostas ao estresse e a proteostase. Alterações na atividade de fatores de splicing e a desregulação do spliceossoma são características recorrentes da biologia tumoral e de fenótipos relacionados ao sistema imune, tornando o SART3 um nó útil para estudar a remodelação do transcriptoma em contextos relevantes para a doença. Como um antígeno imunogênico descrito em múltiplas neoplasias, a SART-3 também tem sido usada para explorar ligações entre processamento de RNA e apresentação de antígenos associados a tumores, sem implicar utilidade clínica.

SART-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SART3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SART-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SART3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SART3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SART-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SART3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SART-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SART-3 em células tumorais com expressão de SART3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.