Sar1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-412122-ACT

O SAR1B humano codifica a Sar1B, uma pequena GTPase COPII que inicia o transporte do RE para o Golgi ao recrutar Sec23/24 e impulsionar a brotação de vesículas a partir de sítios de saída do retículo endoplasmático. Por meio de ligação e hidrólise de GTP reguladas, a Sar1B coordena a seleção de cargas e a curvatura de membrana, dando suporte à secreção, ao tráfego de lipoproteínas e a redes mais amplas de proteostase ligadas às respostas ao estresse do RE. A disrupção da dinâmica COPII dependente de SAR1B tem sido associada a distúrbios congênitos de absorção de lipídios e de secreção de quilomícrons, tornando-a relevante para estudos do manejo intestinal de lipídios e da homeostase lipídica sistêmica. A Sar1B também é usada como um nó modelo para investigar a regulação da via secretória, pontos de controle do tráfego de membranas e a comunicação entre organelas em células humanas.

Sar1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SAR1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sar1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SAR1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SAR1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sar1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SAR1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sar1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sar1B em células tumorais com expressão de SAR1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.