SAP 49 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2): sc-407057-KO-2

Visão geral

SF3B4 codifica a subunidade 4 do fator de splicing 3B (SAP 49), um componente central do snRNP U2 no complexo SF3b, que promove o reconhecimento preciso do ponto de ramificação e do sítio de splicing 3′ durante o splicing do pré‑mRNA. Ao ajudar a montar e estabilizar os complexos A e B do spliceossomo, a SAP 49 influencia a seleção de isoformas de transcritos e sustenta programas coordenados de expressão gênica ligados à progressão do ciclo celular, às respostas a danos no DNA e à diferenciação. A ruptura da fidelidade do spliceossomo pode provocar alterações amplas no splicing alternativo e remodelação do proteoma, tornando o SF3B4 um ponto útil para o estudo de redes de processamento de RNA em células humanas. A alteração da expressão de SF3B4 e a disfunção do spliceossomo têm sido associadas a estados patológicos nos quais o splicing aberrante contribui para respostas de estresse celular e crescimento desregulado.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SAP 49 (h2) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SF3B4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SF3B4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SF3B4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SAP 49.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SF3B4 para a investigação da sinalização de SAP 49, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SF3B4 críticos para a função SAP 49
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SF3B4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SAP 49 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SAP 49 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SF3B4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SAP 49 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SAP 49 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SF3B4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SF3B4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.