Sam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-427129

概要

Samm50は、ミトコンドリア外膜に存在する必須のβバレルタンパク質であるSam50をコードしており、Sorting and Assembly Machinery（SAM）複合体の中核を形成します。Sam50はβバレルタンパク質の生合成と膜挿入を協調して担うとともに、ミトコンドリアのタンパク質取り込み系とも機能的に連携し、外膜の構造維持およびミトコンドリアの恒常性を支えます。ミトコンドリアの構築、タンパク質取り込み、呼吸に関連するプロセスの維持に関与することから、SAM複合体機能の変化は、モデル系におけるミトコンドリア機能障害、ストレスシグナル伝達、ならびに神経変性や代謝疾患様表現型に関連する経路の研究において重要です。マウス細胞では、Samm50の攪乱は、マイトファジーや内因性アポトーシスシグナルとのクロストークを含むミトコンドリア品質管理の解析にも用いられます。

Sam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSamm50遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Samm50内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Samm50のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sam50タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sam50シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Samm50欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sam50の機能に不可欠なSamm50エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Samm50ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSam50 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Samm50遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sam50 HDRプラスミド（m）および Sam50 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSamm50ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSamm50標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。