SAHH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402617

Visão geral

AHCY codifica a S-adenosil-homocisteína hidrolase (SAHH), uma enzima-chave do ciclo da metionina que hidrolisa a S-adenosil-homocisteína em adenosina e homocisteína, sustentando assim a capacidade de metilação celular ao aliviar a inibição por retroalimentação das metiltransferases dependentes de S-adenosilmetionina. Por meio dessa função, a SAHH influencia a regulação epigenética, a metilação de RNA e proteínas e a biossíntese de fosfolipídios, integrando o metabolismo de um carbono a um controle mais amplo de programas de expressão gênica. A perturbação da atividade de AHCY pode alterar o potencial de metilação e a homeostase metabólica, afetando vias ligadas à proliferação, diferenciação e respostas ao estresse. A função alterada da SAHH tem sido estudada no contexto de distúrbios associados à metilação e de fenótipos celulares relevantes para a biologia do câncer e para modelos de pesquisa imunológica e neurológica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO SAHH (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene AHCY em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do AHCY, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do AHCY na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína SAHH.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de AHCY para a investigação da sinalização de SAHH, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) AHCY críticos para a função SAHH
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos AHCY para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo SAHH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo SAHH Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus AHCY. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo SAHH Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR SAHH (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia AHCY para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo AHCY definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.