SA-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401222

Descripción general

STAG2 codifica la subunidad humana del cohesino SA-2, un componente central del complejo cohesina que media la cohesión entre cromátidas hermanas y la organización del genoma a niveles superiores. SA-2 favorece una segregación cromosómica fiel durante la mitosis y la meiosis, contribuye a la reparación de roturas de doble cadena del ADN y ayuda a regular interacciones de largo alcance entre potenciadores y promotores que moldean los programas de transcripción. A través de estas funciones, STAG2 se relaciona con el control del ciclo celular, las respuestas al estrés replicativo y las vías de arquitectura de la cromatina. La alteración de STAG2 se observa con frecuencia en estudios genómicos de cáncer y se asocia con inestabilidad cromosómica y cambios en la regulación génica, por lo que es un locus ampliamente estudiado en investigación sobre mantenimiento del genoma.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SA-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen STAG2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del STAG2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de STAG2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SA-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en STAG2 para la investigación de la señalización de SA-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de STAG2 críticos para la función de SA-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de STAG2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SA-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SA-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus STAG2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SA-2 (h) y el plásmido HDR SA-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología STAG2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana STAG2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.