S-100PBP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-413030-ACT-2

A S100PBP humana (proteína de ligação à S-100P), codificada por S100PBP, atua como parceira de ligação intracelular da proteína ligante de cálcio S100P e está implicada na coordenação da sinalização dependente de Ca2+ com a organização do citoesqueleto e a dinâmica de adesão celular. A proteína tem sido associada à regulação de processos relacionados a microtúbulos e pode influenciar o tráfego vesicular e eventos ligados ao ciclo celular por meio de redes de interações proteína–proteína que modulam a polaridade e a motilidade celulares. Padrões alterados de expressão de S100PBP foram relatados em múltiplos contextos tumorais, sustentando sua utilidade para dissecar mecanismos subjacentes à migração, à invasão e às transições epitélio–mesênquima, sem implicar desfechos clínicos. A edição gênica ou a perturbação de S100PBP em modelos de células humanas permite a investigação funcional de vias centradas em S100P, o mapeamento de parceiros de interação e a avaliação de efeitos transcricionais e fenotípicos a jusante relevantes para a biologia do câncer e a pesquisa em sinalização celular.

S-100PBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100PBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

S-100PBP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100PBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100PBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de S-100PBP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100PBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de S-100PBP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via S-100PBP em células tumorais com expressão de S100PBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.