RyR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402986

概要

RYR2 は、筋小胞体／小胞体上に存在する四量体の細胞内 Ca²⁺ 放出チャネルであるリアノジン受容体2（RyR-2）をコードしており、カルシウム誘発性カルシウム放出（CICR）を生み出すことで興奮収縮連関を仲介します。RyR-2 の活性は、心筋細胞の収縮、ミトコンドリア代謝、ならびに CaMKII やカルシニューリン／NFAT に連動した転写応答を含む Ca²⁺ 依存性シグナル伝達経路を調節する Ca²⁺ トランジェントを協調的に制御します。チャネル機能は、巨大分子複合体の形成、翻訳後修飾、内腔側 Ca²⁺ センシングによって規定され、アドレナリン作動性入力と細胞内 Ca²⁺ 恒常性を統合します。RYR2 の遺伝学的・機能的な攪乱は、遺伝性不整脈症候群や心筋症関連の表現型と関連しており、心臓のカルシウム制御とストレス応答性シグナルを研究するうえで中心的な結節点となっています。

RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRYR2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RYR2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RYR2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockoutタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockoutシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RYR2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockoutの機能に不可欠なRYR2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RYR2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RYR2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout HDRプラスミド（h）および RyR-2 CRISPR/Cas9 Knockout HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRYR2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRYR2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。