RYK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402654
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- RYK O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico RYK, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:RYK Anticorpo (F35 P7 D7 F5): sc-83082
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
RYK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402654 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
RYK (receptor tirosina-quinase do tipo receptor) codifica um receptor transmembrana atípico de passagem única que atua principalmente como correceptor na sinalização WNT não canônica, incluindo vias conduzidas por WNT5A que regulam a polaridade celular, a migração direcional e a dinâmica do citoesqueleto. Por meio de interações com ligantes WNT e receptores Frizzled, o RYK pode influenciar a polaridade celular planar e efetores a jusante como a JNK, conectando sinais extracelulares a programas transcricionais e morfogenéticos. A atividade do RYK tem sido associada ao desenvolvimento neural e à orientação axonal, e a desregulação da sinalização RYK/WNT tem sido relatada em contextos de invasão de células tumorais, fenótipos associados à metástase e microambientes inflamatórios. Essas propriedades fazem do RYK um alvo útil para investigar a comunicação cruzada entre a sinalização WNT, a adesão celular e o comportamento migratório em modelos de células humanas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO RYK (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RYK em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RYK, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RYK na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína RYK.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RYK para a investigação da sinalização de RYK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RYK críticos para a função RYK
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RYK para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo RYK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo RYK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RYK. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo RYK Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR RYK (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RYK para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RYK definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.