RUNX2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400183-NIC

RUNX2は、骨芽細胞系譜へのコミットメントと骨格形態形成を統括するマスター制御因子であるrunt関連転写因子2（RUNX2）をコードしており、RUNXコンセンサス配列に結合して、細胞外マトリックス産生と石灰化を制御する遺伝子プログラムを協調的に制御します。RUNX2は、BMP/TGF-β、Wnt/β-カテニン、MAPK、ヘッジホッグ経路からのシグナルを統合し、間葉系前駆細胞における分化、細胞周期進行、転写ネットワークを調節します。RUNX2の活性はクロマチン構造に影響を与え、CBFBなどの補因子と協調して、COL1A1、ALPL、BGLAPを含む骨形成関連遺伝子の発現を促進します。RUNX2の発現または機能の異常は、発生期の骨格疾患、骨恒常性の変化に関与するほか、EMT関連の転写プログラムやマトリックスリモデリングへの作用を介して、腫瘍の進展や転移において文脈依存的な役割を果たすことが示唆されています。

RUNX2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RUNX2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RUNX2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RUNX2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RUNX2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。